皇冠体育网站
哈维氏弧菌的快速检测方法研究
编辑: admin 来源: 未知 时间: 2020/6/23 23:36:09

皇冠体育网站哈维氏弧菌的快速检测方法研究

2018年,财政总收入达861.05亿元,是1949年的12179倍,年均增长14.6%。改革开放以来,城乡居民收入渠道由单一向多渠道拓宽,生活质量显著提高,在岗职工年平均工资从1978年的537元增加到2018年的65915元。城镇居民人均可支配收入从1978年的324元增加到2018年46111元;农村居民人均可支配收入从1978年的75元增加到2018年20277元。【妈】【妈】【说】【着】【她】【的】【歪】【理】【:】【你】【已】【经】【会】【骑】【了】【,】【还】【买】【了】【干】【嘛】【?】【我】【说】【:】【这】【是】【一】【项】【运】【动】【嘛】【,】【可】【以】【强】【身】【健】【体】【呀】【,】【禁】【不】【住】【我】【的】【软】【磨】【硬】【泡】【,】【妈】【妈】【终】【于】【答】【应】【买】【了】【当】【作】【提】【前】【送】【我】【的】【生】【日】【礼】【物】【,】【哦】【耶】【!】

【摘要】:哈维氏弧菌(vibrioharveyi)是一种发光弧菌,尤其在虾中最常见。 已感染哈维氏弧菌的虾一旦不能得到及时处理,虾经常会出现体表肌肉不同程度的充血溃烂并且某些部位在黑暗处可以发光,喂养一段时间后会死亡,给养殖业带来巨大的损失。 因此,为养殖户和监管部门建立可监测哈维氏弧菌的方法很重要。 目前,哈维氏弧菌的检测方法主要包括传统培养基培养法、免疫学分析法和分子生物学法三种。

哈维氏弧菌传统培养法存在耗时长、操作琐屑等问题。 现有应用较为普遍的哈维氏弧菌免疫学分析法以酶联免疫吸附法和免疫纸层析技术为主,其中胶体金标记层析试纸条法操作简便,反应仅需十几分钟,适合现场检测,但是其灵敏性较低,以定性和半定量为主,因此有必要研究更为灵敏的,并且可准确定量的哈维氏弧菌免疫层析检测方法。 分子生物学方法中,LAMP(reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplification)法和RAA(RecombinaseAidedAmplification)法属于恒温扩增,可以使用简单恒温设备即可进行病原菌的扩增,方法简单,不需使用像PCR仪这类变温设备,极大地降低了检测条件。

为研发适合于现场监测哈维氏弧菌和实验室快速鉴别哈维氏弧菌的方法,本文首先研究了基于磁性免疫层析试纸条检测哈维氏弧菌的方法,通过优化抗体偶联量和层析液添加比例,建立了哈维氏弧菌磁性免疫层析检纸条的制备工艺;为提高试纸条的检测灵敏度,进一步对C线和T线的抗体包被浓度进行了优化,从而建立了适合于现场检测的磁性免疫层析试纸条的制备方法,并对其准确性、灵敏度、特异性等检测性能进行评价。

其次,本文根据分子生物学相关原理,通过对检测时间、引物筛选等检测过程的优化,建立了LAMP和RAA检测哈维氏弧菌的方法,并对其准确性、灵敏度、特异性进行评价。 主要结果如下:1.以甲醛灭活的哈维氏弧菌ATCC33842为灭活抗原,对新西兰大白兔进行免疫,制备获得效价大于1:80000的哈维氏弧菌多克隆抗体,ELISA分析发现该抗体仅对哈维氏弧菌有特异性反应。 将自制的哈维氏弧菌多抗偶联到磁性纳米材料表面,利用双抗夹心法原理构建哈维氏弧菌磁性免疫层析试纸条。 通过优化磁珠偶联抗体量、C线与T线包被抗体浓度、试纸条层析体系,得到1mg磁珠偶联抗体量为140μg,C线与T线浓度均为2mg/mL,Tween-20含量为10%(V/V),BSA浓度为/mL,BS缓冲液pH为9时,试纸条检测效果最佳,建立了基于磁性纳米层析试纸条检测哈维氏弧菌的方法。

哈维氏弧菌磁性免疫层析试纸条定性灵敏度为1×10~3CFU/mL,定量灵敏度为5×10~2CFU/mL,既能定性也能准确定量检测,且两种检测限均在哈维氏弧菌死亡致病限以内,与现有胶体金试纸条相比灵敏度提高100倍以上,检测时间10~20分钟,操作简便,适合于现场检测。 2.依据LAMP引物设计原则合成5套不同引物,通过优化扩增温度与引物,建立在60℃恒温扩增的LAMP检测哈维氏弧菌的方法。 通过特异性评价,发现本研究构建的LAMP方法仅对不同来源的哈维氏弧菌有反应,表现出良好的特异性。

该法检测限/μL,比传统PCR法检测灵敏度高出10~4倍,检测时间为60分钟。

通过自主设计RAA引物与探针,通过不同引物之间的组合筛选出最佳引物,对建立的RAA检测方法进行了特异性与灵敏度评价,发现该方法特异性良好,检测限为×10~(-1)copies/μL,灵敏度比PCR高出10~5倍,检测时间为20分钟,是较好的快速检测哈维氏弧菌的方法。

大大缩短了检测时间,比较适合于常规实验室快速鉴别与筛查哈维氏弧菌。

综上所述,本文分别在免疫学和分子生物学两方面的基础上研究哈维氏弧菌的快速检测方法,建立了比较适合于现场检测哈维氏弧菌的磁性免疫层析试纸条的方法,建立了比较适合于常规实验室快速鉴别和筛查哈维氏弧菌的LAMP和RAA方法。

这三种检测方法均缩短了哈维氏弧菌的检测时间,达到快速、高效地检测效果。

【学位授予单位】:上海海洋大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2019【分类号】:。

皇冠体育网站哈维氏弧菌的快速检测方法研究他们不仅懂得为孩子引路,还懂得放手让他们自己走。在引路的过程中,他们已经把最可贵的精神,悄悄地传递给了子女。为人父母的,不是拿着鞭子在后面驱赶着孩子向前,而应该在任何时候,都跑在孩子前面或者陪同着孩子一起进步。每个孩子都要长成独当一面的大人,只愿在他人生中最需要引导的那一段时间里,父母始终秉持着烛光,用自己的行动为他引路。

外资项目投资总额为去年同期的2.8倍。其中,南京奇柯全球商品总部项目拟新建EmotionPark汽车体验城、美食迪士尼(coop超市合作)、国际时尚名品直销中心、家居时尚产业中心、五星级或国际设计师酒店、总部五A甲级办公、高端人才社区配套及人才公寓在内的全球商品总部。皇冠体育网站【那】【位】【叔】【叔】【把】【我】【们】【请】【到】【他】【家】【,】【还】【说】【要】【给】【我】【们】【煮】【饭】【吃】【。】【虽】【然】【我】【们】【很】【想】【吃】【,】【却】【推】【辞】【了】【,】【说】【:】【叔】【叔】【,】【您】【的】【好】【意】【我】【们】【已】【经】【领】【了】【,】【拾】【金】【不】【昧】【是】【我】【们】【小】【学】【生】【应】【该】【做】【的】【,】【谢】【谢】【您】【!】【我】【们】【回】【家】【晚】【了】【,】【家】【人】【会】【担】【心】【的】【,】【叔】【叔】【再】【见】【!】

相关文章:

上一篇:保研大战将至 八成院士学术成长道路未必从一而终! 下一篇:没有了
最近更新
随机文章